Aula 2 - Preparo de Meios de Cultura

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Curso Técnico de Biotecnologia Leonardo Emanuel de O. Costa [email protected]

Preparo de Meios de Cultura

Leonardo Emanuel de Oliveira Costa – [email protected] Microbiologia Geral

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2013/1

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Composição aproximada de elementos químicos de uma célula bacteriana (E. coli) ELEMENTO

FONTE

% PESO SECO

C

CO2, açúcares, ácidos orgânicos, etc.

50

O

O2, atmosfera, H2O

20

N

N2, NO3, NH3, aas, bases nitrog.

14

H

H2, atmosfera, H2O, comp. orgânicos

8

P

Fosfato inorgânico (PO43-)

3

S

Sulfato, H2S, sulfetos metálicos

1

K

Solo, sais

1

Na

Solo, sais

1

Ca

Solo, sais

0,5

Mg

Solo, sais

0,5

Fe

Solo, sais

0,2

Outros

Solo, sais

0,3

Microbiologia Geral

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MEIOS DE CULTURA Podem ser classificados quanto a: Característica física  Sólido

Microbiologia Geral



Líquido



Semi-sólido 2013/1

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Composição química  

 

 

Sintético ou Definido: todos os componentes e quantidades são conhecidos; Complexo: contém componentes cuja composição não é precisa. Exemplos: extrato de carne, extrato de levedura, peptona, sangue, leite, etc. Função: Diferencial: permite a distinção de colônias Seletivo: contém agente inibidor que impede o desenvolvimento de determinado microrganismo Meio de enriquecimento: aumenta o número de determinado microrganismo em uma amostra Meio redutor: apresenta menor tensão de O2

Microbiologia Geral

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Meio diferencial – Ágar Sangue

Colônia não hemolítica Colônia hemolítica Colônia não hemolítica Microbiologia Geral

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Meio diferencial – Ágar Sangue Crescimento de Staphylococcus aureus Superfície da placa

Fundo da placa

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Meio diferencial – Ágar Sangue Crescimento de Streptococcus pyogenes Superfície da placa

Fundo da placa Beta-hemólise 7

Microbiologia Geral

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Meio diferencial – Chromagar ✓ Diferenciar E. coli de outros coliformes ✓ Diferenciar espécies de Candida (C. albicans, C.glabrata, C. tropicalis, C. krusei)

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Meio seletivo e diferencial para enterobactérias – Ágar MacConkey

Colônias brancas – não fermentam lactose

Colônias rosas fermentam lactose 9

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Meio seletivo e diferencial para enterobactérias – Ágar EMB Lactose negativo

Lactose positivo Microbiologia Geral

Colônia típica de Escherichia coli

Brilho verde metálico e lactose positivo 2013/1

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Meio seletivo e diferencial para Salmonella – Ágar XLD E. coli forma colônias amarelas em função da fermentação da lactose

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Salmonella forma colônias vermelhas em função da descarboxilação da lisina com centro negro devido a produção de H2S

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Meio seletivo e diferencial para Salmonella – Ágar XLD

Colônias típicas de Salmonella sp.

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Meio seletivo e diferencial para Staphylococcus – Ágar Baird Parker

Colônias típicas de Staphylococcus aureus – pequenas negras (redução do telurito a telureto) e com halo de hidrólise de lecitina (lipídeo da gema de ovo) Agentes inibidores: telurito e cloreto de lítio Microbiologia Geral

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Fatores do ambiente que afetam o crescimento microbiano a) Atmosfera b) Temperatura

c) pH d) Disponibilidade de água 14

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Efeito da atmosfera de incubação – presença ou ausência de O2 a) Aeróbios obrigatórios

b) Anaeróbios obrigatórios c) Anaeróbios facultativos

d) Microaerófilos e) Aerotolerantes Microbiologia Geral

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Cultivo anaeróbio 1. Jarra de anaerobiose 2. Câmara de anaerobiose

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Métodos de esterilização de meios de cultura e outros materiais usados em microbiologia

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Funcionamento de uma autoclave

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Cabine de segurança microbiológica – Fluxo laminar ✓ Esterilização por radiação UV do ar e das superfícies ✓ Manipulação asséptica de culturas e materiais

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Esterilização de substâncias termolábeis por sistemas de filtração

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