2 Seleccion y Validacion de metodos

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SELECCIÓN Y EVALUACIÓN DE MÉTODOS EN QUÍMICA CLÍNICA PRACTICANATO PREPARATORIO - BIOQUÍMICA Prof. Ma. Cecilia Sánchez Departamento de Bioquímica Clínica, (CIBICI)-CONICET Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba

BIOQUÍMICO

MIDE

Disminuir la incertidumbre total del proceso analítico

Nuevo perfil Bioquímico

Parámetros de seguridad y confiabilidad analítica

MEDICION: 3 ETAPAS DEL LABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICO

•Consulta

•Prescripción médica Etapa Pre-analítica

•Condiciones de toma de muestras •Manipulación y conservación de muestras •Recepción de muestras

Etapa Analítica

Etapa Post-analítica

•Tratamiento de muestras •Procesos analíticos •Información de los resultados: validación biológica, interpretación y recomendaciones •Envío de informes analíticos •Información adicional al clínico/paciente

Cada una de estas etapas cuenta con organigramas propios y ejecutan protocolos de funcionamiento definidos por procedimientos escritos

¿Cuándo mido?

¿Cómo mido?

¿Para qué mido?

MEDICIONES

METROLOGIA

➢Ciencia de las mediciones y sus aplicaciones ➢Requiere de un vocabulario internacionalmente aceptado. ➢Varios acuerdos, establecidos en normas Internacionales definen y actualizan términos metrológicos. ➢Guía ISO 99:2007 (Vocabulario Internacional de metrología Conceptos básicos, generales y términos asociados (VIM 3er ed) se encuentran explicitados los términos metrologicos generales ➢Guías son retomadas por los institutos de normalización de cada país ➢En Argentina: Instituto Argentino de Normalización y Certificación (IRAM).

–

Qué uso pueden tener los resultados o mediciones de un test en el Laboratorio Clínico? ✓Identificar ✓Tipificar

¿Para qué mido?

✓Cuantificar ✓Trazar Screening: es la identificación de una enfermedad en aparentemente sanos

individuos

Diagnóstico: involucra la identificación de una enfermedad al investigar síntomas. Usualmente se ejecuta un rango de test de laboratorio relevantes.

Pronóstico: referido a la severidad de la enfermedad Monitoreo: involucra la repetición de los test de laboratorio durante un acotado nivel de tiempo. El Monitoreo puede incluir un término en tiempo Corto, Mediano o Largo.

Para que los ensayos de laboratorio contribuyan

adecuadamente

en

la

elaboración

de

las

correspondientes respuestas, el laboratorio debe

garantizar la calidad del servicio que brinda y la

de los ensayos que realiza.

Desde hace ya un tiempo las autoridades sanitarias señalan que debería ser parte de la requisitoria para la autorización de los establecimientos de salud

Hoy…dentro de las actividades profesionales reservadas al título de Bioquímico, aprobadas por Ministerio de Educación, Anexo V Res Nº 565/2004.

El bioquímico es capaz de ejercer la dirección técnica de los laboratorios, de participar en el asesoramiento y confección de normas de bioseguridad y la gestión de la calidad en el laboratorio.

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS ANALITICOS EN FUNCION DE SU EXACTITUD (VERACIDAD Y PRECISION)

Que es la trazabilidad? Cadena ininterrumpida de comparaciones que aseguran la exactitud de la medida y/o instrumentos implicados en el desarrollo del método con respecto a los demás elementos de la cadena. En análisis químico, pasa por las sustancias de referencia, los patrones químicos tipo primario y secundario, los estándares físicos, los pesos atómicos, etc. El concepto de trazabilidad se aplica tanto al resultado de un análisis como al instrumento con el que se obtiene.

C.C.Externo

Trazabilidad

Método Definitivo

El Proceso Analítico sobre muestras biológicas

Método de Referencia Métodos de Rutina

C.C.Interno

Obtenidos por consenso

Certificaciones de asociaciones profesionales u organismos oficiales

La seguridad analitica de un metodo esta sujeta a tres aspectos fundamentales… Requerimientos de Calidad en términos de imprecisión y trueness (bias) Establecer (fijar) las metas analíticas (valores) requeridas para cada situación particular

Validación/Verificacion de Métodos Identificar métodos existentes o desarrollar nuevos

Control de Calidad Interno e Interlaboratorio Evaluar si el método seleccionado o desarrollado permite obtener resultados que cumplen con los requerimientos fijados

SELECCIÓN Y EVALUACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS 1-ESPECIFICAR METAS PARA LAS CARACTERÍSTICAS ANALÍTICAS: FIJAR MAGNITUD ERROR TOLERABLE/A CEPTABLE QUE NO INVALIDE UTILIDAD MÉDICA DEL RESULTADO NIVELES DE DECISIÓN MÉDICA (Xc) concentraciones empleadas por el médico para tomar decisiones en relación al diagnóstico, seguimiento o terapéutica

determinación de potasio en suero (3,5 -5,0 mEq/L) Xc1 = hipopotasemia y Xc2 = hiperpotasemia

determinación de colesterol en suero (200 mg/dL) Xc1 = hipercolesterolemia

Requerimientos de Calidad Estándares de ejecución analítica que aseguran el resultado de un método de medición generalmente vinculado con el interés clínico del mesurando. Generalmente se expresan en términos de: *Error Total Aceptable *Imprecisión aceptable y *Veracidad [trueness] medida en términos de un bias aceptable Entidades de mayor difusión de Requerimientos de Calidad en Química Clínica: *CLIA’88 (USA) *EQA (Europa)

Validación de Métodos Primariamente definido con : – IDENTIFICACIÓN del origen de los potenciales errores – La VALORACIÓN de los mismos.

Un ensayo de Validación describe en términos matemáticos y valorables las características de ejecución de un ensayo.

CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)

Control de Calidad A través del empleo de muestras controles se determina la estabilidad analítica de un método en referencia con los Requerimientos de Calidad y la Validación de Métodos. El Control de Calidad es INTERNO (CCI) Y EXTERNO (CCE)

El CCI permite detectar errores que inciden en la precisión y exactitud del método Procedimientos de CCI más empleados en Química Clínica están basados en: *Cartas de Levey-Jennings *Reglas controles basadas en la distribución aleatoria de mediciones sucesivas. *La Probabilidad de Detectar Errores (Pde) a través del empleo de las Cartas de Especficaciones Operativas (OSPec Charts) El CCE es utilizado como pauta de control interlaboratorios. Puede brindar información sobre la presencia de Bias en el método.

ESQUEMA DE DESARROLLO E IMPLEMENTACIÓN DE EQUIPOS DIAGNÓSTICOS PARA USO IN VITRO EN LABORATORIOS DE ANÁLISIS CLÍNICOS ASESORAMIENTO VENTA FABRICANTE

LABORATORIO ANÁLISIS CLÍNICOS

NECESIDAD

VERIFICACIÓN ANALÍTICA (Sigue Criterios CLSI/NCCLS: EP10 y EP15)

DESARROLLO CONTROL DE CALIDAD INTERNO

VALIDACIÓN ANALÍTICA (Sigue criterios CSLI/NCCLS: EP5; EP6; EP9; EP17, EP21, C28)

CONTROL DE CALIDAD EXTERNO

Guías CLSI (Clinical and Laboratory Standard Institute) Debido a la dispersión existente en la bibliografía nacional e internacional referida a la Validación de Métodos, la Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), anteriormente NCCLS, ha establecido guías para la Validación y Evaluación de Métodos, las cuales fueron diseñadas con el propósito de uniformar criterios experimentales y estadísticos de aplicación directa para la Validación y Evaluación de Métodos. Estas Guías se identifican con las siglas EP y son el resultado del consenso mundial logrado por un alto número de consultas de expertos pertenecientes a centros universitarios prestigiosos y laboratorios de salud. Existen Guías recomendadas para los Fabricantes y otras para los Laboratorios

DEFINICIONES

VALIDACIÓN/VERIFICACION DE MÉTODOS: demostración del cumplimiento de los requerimientos de calidad establecidos (Entes regulatorios, Asociaciones de Normalización de Estándares y Medidas, Fabricantes, etc.) a través de la evaluación de: • Precisión • Veracidad [Trueness] medida en términos de Bias • Linealidad (Criterio similar para validar calibración) • Rango de Medición o Rango Reportable o Intervalo de Medición •Sensibilidad •Límite de Detección •Límite de Cuantificación •Robustez (Robustness)

Precisión (ISO 3534-1; EP5-A2/CLSI-NCCLS)

La PRECISIÓN de un método es el grado de coincidencia entre resultados individuales cuando el procedimiento es aplicado repetidamente sobre una misma muestra homogénea y bajo condiciones claramente estipuladas. IMPRECISIÓN – Es la dispersión de resultados independientes medidos bajo condiciones especificadas. Es cuantitativamente expresado en términos de desviación estándar (s) o Coeficiente de Variación porcentual (%CV)

Precisión (ISO 3534-1; EP5-A2/CLSI-NCCLS)

REPETIBILIDAD  Within-run precision (o precisión intraensayo. Mismo operador, mismo ensayo) PRECISIÓN INTERMEDIA  Within-laboratory precision (Incluyen todas las condiciones que definen otros tipos de precisión (Intercorrida, Interdiaria. Interequipos, etc.)

REPRODUCIBILIDAD  Between-laboratory variability (Interlaboratorio) Mismo método, diferentes operadores, tiempo, lotes y en diferentes laboratorios

Veracidad (Trueness): ➢El error sistematico afecta tanto a una medida individual como a la media de medidas repetidas y es la diferencia entre el promedio de valores replicados y un valor de referencia aceptado como verdadero. ➢La veracidad se refiere a un procedimiento de medida. Se cuantifica como error sistematico o sesgo (bias).

¿ Como podemos describir cada uno en términos de dispersión y cercanía al valor real?

μ Valor “real

”

Dispersión alrededor de la media: CB

VERACIDAD A>B>C

Exactitud (accurancy) (ISO 3534-1; EP15-A2 CLSI/NCCLS)

Es el grado de concordancia entre un valor medido y un valor verdadero del mesurando (VIM 2.13) Se relaciona, de forma inversa, con el error de medida.

Exactitud de la medición

EXACTITUD

error de medida

error sistemático

VERACIDAD

error aleatorio

PRECISION

X

Valor Verdadero

k.S (imprecisión)

Bias (Veracidad)

Error Total ES + k s

Error Total Permitido (ETp)

s (k)

Y)

Y Y)

X

Corrida analítica Conjunto de muestras analizadas en forma continua, bajo las mismas condiciones experimentales (Qca Biol. Analitica)

Un intervalo dentro del cual la veracidad (trueness) y precisión de un sistema de medición se mantienen estables, pero no puede ser superior a 24 h o menor a la frecuencia recomendada por el fabricante (CLSI).

Calibrador

Controles

Muestras

MUESTRA CONTROL Muestra que introducida en la corrida analítica permite evaluar continuamente si el desempeño del método es estable o no.

Los materiales control pueden clasificarse en a) materiales de control con valores asignados que permiten controlar precisión y veracidad b) materiales de control sin valores asignados, los cuales permiten controlar precisión y cambios en la veracidad Los primeros representan la mejor opción en cuanto permiten calcular fácilmente el error aleatorio, sistemático y total en todo momento y en función del tiempo. Son materiales comerciales y costosos. Es importante saber si el valor asignado fue establecido por consenso, es decir, como el promedio estadístico del valor hallado en muchos laboratorios, o por un método de referencia.

Los materiales concentración.

control

pueden

prepararse

con

diferentes

niveles

de

REQUISITOS: ✓debe ser estable en el tiempo, mínimo 2 años a temperatura de refrigeración. ✓debe presentar una baja variabilidad entre cada vial, CV% menor al 0,5 %

✓ no contener sustancias interferentes para los métodos empleados. ✓idealmente la matriz debe ser igual a la de las muestras problemas. ✓el volumen de material control en stock deberá ser tal que permita trabajar durante un tiempo suficiente para poder realizar un seguimiento a largo plazo. ✓debe estar acompañado de instrucciones acerca de reconstitución, uso, almacenamiento, estabilidad pos-reconstitución y todo otro comentario de utilidad.

CALIBRADORES Materiales de referencia primarios o certificados (obtenidos por Metodos Definitivos) Materiales de referencia secundarios (obtenidos por Metodos de Referencia)

Poseen concentración conocida y generalmente matriz acuosa

BIBLIOGRAFÍA

-Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, Fifth Edition. Carl A. Burtis and Edward R. Ashwood, eds. Philadelphia: WB Saunders, 2001, 1091 pp. ISBN 0-7216-8634-6. y ediciones posteriores -Burnett y Westgard. Arch. Pathol. Lab. Med : 116 : 777-780, 1992 -Taylor John K.. Validation of Analytical Methods. Analytical Chemistry. Vol. 55, Nº 6, 1983. -Vocabulario Internacional de Metrologia Disponible en www.inti.gob.ar -http:// www.westgard.com (Sitio oficial de Westgard JO, PhD. Westgard Quality Corporation). http://www.clsi.org