APNP 11 Análise Microbiológica de Coliformes e E. coli

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“Este é um material pedagógico desenvolvido por docente do IFRJ. Seu uso, cópia, edição e/ou divulgação, em parte ou no todo, por quaisquer meios existentes ou que vierem a ser desenvolvidos, somente poderão ser feitos mediante autorização expressa de seu autor. Caso contrário, poderão ser aplicadas as penalidades legais vigentes”.

Análise Microbiológica de Coliformes e E. coli Hilana Ceotto Vigoder

Bastonetes Gram-

Enterobactérias

LACTOSE -

LACTOSE + LACTOSE +

LACTOSE -

Ex. Escherichia Klebsiella

Ex. Salmonella Shighella Proteus

COLIFORMES

TOTAIS

TERMOTOLERANTES

Pesquisa de Coliformes Totais ISO 4832 – Contagem em placas

Isolamento em VRBA Ágar cristal violeta vermelho neutro bile

• Cristal violeta – inibição de bactérias Gram-positivas • Vermelho neutro – indicador de pH (fermentação da lactose)

• Prova presuntiva

VBBL Verde Brilhante Bile Lactose

Pesquisa de Coliformes Totais ISO 4831 – Número mais provável PREPARO DA AMOSTRA Pesagem e diluição

ENRIQUECIMENTO Distribuir 1 ml de cada diluição em 3 tubos contendo LST - 370C 18-24h

CONFIRMAÇÃO Transferir uma alçada dos tubos positivos para caldo VBBL - 370C 24-48h

QUANTIFICAÇÃO Calcular NMP (tabela)

ATENÇÃO A tabela deve corresponder a diluição realizada!

Exemplo: Nº de tubos positivos 10-1= 3 10-2= 1 10-3= 1 3-1-1 = 75 NMP/g

Pesquisa de E. coli Farmacopeia Brasileira (pag. 403) PREPARO DA AMOSTRA Diluição 1:10, mínimo 1g da amostra

ENRIQUECIMENTO Adicionar 10 ml da diluição 90 mL de caldo de enriquecimento (Caldo caseínasoja) ou quantidade correspondente a 1 g ou 1 mL - 320C 18-24h

Seleção Transferir 1 mL da amostra enriquecida para 100 mL de Caldo MacConkey 430C, 24 a 48 h

SUBCULTURA Ágar MacConkey - 32,5 °C,18 a 72 h

Ágar MacConkey Interpretação: o crescimento de colônias vermelhas, geralmente não mucosas, com micromorfologia característica de bacilo Gram-negativo, indica presença provável de E. coli que deve ser confirmada por testes de identificação microbiana. ✓ se não for observado crescimento de tais colônias

✓ se as provas microbianas forem negativas

LACTOSE +

LACTOSE -

E. coli

Indol (+)

VM (+)

VP(-)

Citrato (-)

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