5 - 2 Manutencao de Cepas BACGERALCNPQ.doc

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CEPAS DE REFERÊNCIA: MANUTENÇÃO DE CEPAS NO SETOR DE MICROBIOLOGIA Samanta Anunciato Zynich Bióloga – CRBIO 63621-03P

1997 Laboratório de Microbiologia

2004 Implantação da Norma ISO/IEC 17025

2009
Bactérias Heterotróficas
Coliformes Totais
Coliformes Termotolerantes
Endotoxinas

Requisitos Essenciais


Profissionais qualificados
Equipamentos adequados
Espaço físico
Meios de Cultura
POPs
Livros de registros
Organização, rapidez e clareza nos laudos
Controle de qualidade

O que são CEPAS DE REFERÊNCIA? REFERÊNCIA
Significado da palavra cepa: Cepa origem do latim cippus = tronco, família, origem, linhagem
De acordo com a ISO/TS 11133-1: “Microrganismos identificados pelo menos em nível de gênero e espécie, catalogados e descritos de acordo com suas características, de preferência, mencionando sua origem.”

CEPAS DE REFERÊNCIA
Obtidos a partir de uma coleção nacional ou internacional reconhecida.
Materiais de referência RASTREÁVEIS!

Quem são as CEPAS DE REFERÊNCIA? REFERÊNCIA 1. • • 2. • • • •

Cepas ATCC (American Type Culture Collection) Fundada em 1925; Necessidade de obter uma coleção central de microrganismos disponível mundialmente. Nacionais: INPA – Instituto Nacional de Proteção à Amazônia CBMAI - Coleção Brasileira de Microrganismos de Ambiente e Indústria INCQS - Coleção de Microrganismos de Referência do Instituto Oswaldo Cruz IOC/FIOCRUZ Instituto Adolfo Lutz

CEPAS DE REFERÊNCIA
Verificação de desempenho do crescimento bacteriano em meios de cultura;
Controle de funcionamento dos reagentes e corantes usados na rotina bacteriológica;
Verificação e validação de métodos microbiológicos;
Monitoramento do desempenho do laboratório.

Escherichia coli ATCC 25922
Descoberta no final do séc. XIX por Theodor Escherich;
Bacilo Gram negativo flagelado;
Pertence à família das Enterobacteriaceae;

Escherichia coli ATCC 25922 Controle positivo:


Ágar M-TEC

Teste de Urease in-situ

Escherichia coli ATCC 25922

Controle Positivo:


M-Endo Agar Less

Escherichia coli ATCC 25922 Controle positivo:


TSB
Tryptone Glucose Yeast Agar

Staphylococcus aureus ATCC 25923 • Estafilococo Gram positivos e coagulase-positivos

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Controle negativo:


Agar M-TEC
Agar M-Endo Agar Less

Cepa de referência Sub-cultivada uma só vez

Estoques de referência Sub-cultivada uma só vez

Cultura de Trabalho Uso de Rotina

1° Passo
Reconstituir as cepas de acordo com as orientações do fabricante:

2° Passo
Verificar a pureza da cepa Ágar nutriente e

realizar testes bioquímicos para a confirmação da identificação:

3° Passo 1.

Realizar a semeadura em Agar Nutriente inclinado. Armazenar à 2-8°C.

2. Armazenar em criotubos, 85% de cultura de microrganismos e 15% de glicerina, na temperatura de –20/-30°C.

Todas as culturas são rotuladas com o nome das bactérias, número de referência, lote interno e data do repique.

DISCUSSÃO
Tempo de Armazenamento: Estoque em Ágar •Repique mensais; •Repique a cada 6 meses; •Não exceder 5 repiques!!!!

Estoque em TSB glicerinado •Validade de 1 ano; •Não exceder 5 repiques!!!!

MODELO GREEN LAB • • • •

Reconstituição da cepa em TSB; Verificação da pureza; Testes bioquímicos; Inoculação em AN inclinado – temperatura de 2 – 8°C, repiques a cada 6 meses = ESTOQUE DE REFERÊNCIA. • Conservação em criotubos – temperatura de –20/-30°C com validade de 1 ano = CULTURA DE TRABALHO

Reconstituição da Cepa

Caldo TSB

Preparo dos criotubos

Estriamento em Agar Nutriente Preparo dos criotubos

1° passagem

2° passagem Repiques de 6-6 meses

X passagem

Após o último repique, compra-se nova cepa de referência!! referência

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS • ISO/TS 11133-1 e 11133-2: Guidelines on preparation and production of culture media; • ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005 – Requisitos gerais para competência de laboratórios de ensaio e calibração. • ANVISA – Habilitação para laboratórios de microbiologia – Séries temáticas, Vol.3 março/06. • ATCC – Technical Bulletin no. 6 • Trabulsi, L.R. & col. – Microbiologia – Livraria Atheneu, 1991 • Cefar diagnóstica Ltda – Metodologia para conservação e utilização de cepas microbianas – 2008.

AGRADECIMENTOS
Rede Metrológica;
Márcia Thewes;
Ana Marisa Alves;
Green Lab.

Green Lab OBRIGADA PELA ATENÇÃO DE TODOS!!

Rua Felipe de Oliveira, 293 Santa Cecília – POA/RS Tel. (51) 3333.9129

www.laboratoriogreenlab.com.br [email protected]